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　　近日，第21屆流感疫苗研討會(huì)（The 21th Meeting Between WHO ERLs, CCs and IFPMA/VE and DCVMN Influenza Vaccine Manufacturers）和第三屆流感疫苗效力檢測(cè)替代方法研討會(huì)（3rd Alternative Potency Assay Workshop）在英國(guó)召開。兩個(gè)會(huì)議均由英國(guó)國(guó)家生物制品檢定所（NIBSC）主辦，會(huì)議主要就流感病毒流行情況、流感疫苗的疫苗株制備、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研發(fā)和疫苗質(zhì)控方法等研究進(jìn)展進(jìn)行研討，共有約60名來(lái)自世界衛(wèi)生組織（WHO）疫苗監(jiān)管核心實(shí)驗(yàn)室、流感參比合作中心（美國(guó)、英國(guó)、澳大利亞、日本及中國(guó)）、藥品制造商協(xié)會(huì)聯(lián)合會(huì)（IFPMA）以及流感疫苗生產(chǎn)企業(yè)的代表參加會(huì)議。中國(guó)食品藥品檢定研究院生物制品檢定所呼吸道病毒室徐康維助理研究員受邀參加了本次大會(huì)。

　　 流感流行情況監(jiān)測(cè)匯總

　　WHO在全球建立了流感疫情監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)，覆蓋幾乎所有的國(guó)家，每個(gè)國(guó)家均設(shè)有若干個(gè)哨點(diǎn)醫(yī)院，負(fù)責(zé)采集流感癥狀患者的樣本，各國(guó)的CDC系統(tǒng)進(jìn)行病毒分離并鑒定，同時(shí)將結(jié)果發(fā)送至WHO設(shè)立的流感合作中心，其結(jié)果作為確定下一年度流感疫苗生產(chǎn)用毒株的依據(jù)。此次會(huì)議上，各合作中心對(duì)2015～2016年度的流感流行情況進(jìn)行了匯報(bào)?？傮w上，今年流感疫情不高于往年流行水平，在日本甚至沒(méi)有監(jiān)測(cè)到流行峰。而在西亞一些國(guó)家如以色列、約旦等則監(jiān)測(cè)到較高水平的2009H1N1pdm流感病毒流行。在我國(guó)，H1N1、H3N2與B型流感均有流行，南方地區(qū)以2009H1N1pdm流感病毒為主，北方地區(qū)以H3N2流感病毒為主。全球主要流行的H1N1病毒株與A/California/7/2009疫苗株比較，抗原性沒(méi)有發(fā)生改變，基因型均為6B型。H3N2型流感病毒今年流行水平較低，并且均能被北半球2015～2016疫苗株（A/Switzerland/9715293/2013）以及南半球2016疫苗株（A/Hong Kong/4801/2014）免疫后血清中和，基因型為3C.2a、3C.3a或3C.3。B型流行程度同樣較低，以Yamagata系為主，與疫苗株B/Phuket/3073/2013比較未發(fā)生變異。

　　在其他類型流感病毒的檢測(cè)中，中國(guó)CDC報(bào)告了H5Nx、H9N2、H7N9及歐亞類禽豬流感H1N1在中國(guó)的流行情況。截至2016年1月，中國(guó)H7N9共發(fā)病684人，死亡277人，其中2015年9月以來(lái)共發(fā)病25人。人感染歐亞類禽豬流感H1N1于2011年我國(guó)江蘇首次發(fā)現(xiàn)，目前感染5人，臨床癥狀均較輕。2015年發(fā)現(xiàn)一例兒童感染病例，中國(guó)CDC獲得的毒株序列顯示該病毒為歐亞類禽豬流感病毒與H1N1dpm09病毒和經(jīng)典豬流感病毒的重配毒株。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)人傳染人跡象。目前中國(guó)CDC正在進(jìn)行相應(yīng)疫苗生產(chǎn)毒株的制備。

　　美國(guó)CDC介紹了H5Nx、H9N2和H7禽流感及H3N2v和H1N1v的流行情況。目前總體例數(shù)較少，主要通過(guò)接觸家禽感染。美國(guó)的農(nóng)業(yè)部門開展了H3N2v和H1N1v在豬中的監(jiān)測(cè)研究，發(fā)現(xiàn)1/4的豬呈現(xiàn)流感陽(yáng)性。

　 　候選疫苗株制備情況分析

　　結(jié)合流感病毒的監(jiān)測(cè)情況，WHO各流感協(xié)作中心組織進(jìn)行生產(chǎn)用毒株的推薦及檢測(cè)用參考品制備工作。美國(guó)紐約醫(yī)學(xué)院2015年共制備了9株2009H1N1pdm、16株H3N2和3株B型的經(jīng)典重配毒株，其中H3N2野毒株分別來(lái)自3c.2a、3c.3a、3c.2、3c.3。英國(guó)NIBSC制備了2株H1N1pdm09、4株H3N2 3c.2a和1株H3N2 3c.3a疫苗重配株。澳大利亞CSL制備了2株H1N1、2株H3N2和1株B型流感疫苗重配株。各重配實(shí)驗(yàn)室制備的重配株的HA滴度和內(nèi)部基因的構(gòu)成各不相同，但很多的重配株均由于內(nèi)部基因未能重配PR8基因（即野毒株）或產(chǎn)量過(guò)低而未進(jìn)一步開展two-way HI test和產(chǎn)量評(píng)估。

　　英國(guó)NIBSC與美國(guó)FDA合作研究利用PR8骨架構(gòu)建和評(píng)價(jià)嵌合式流感疫苗株，RG疫苗的內(nèi)部基因骨架為PR8，表面基因HA和NA的非編碼區(qū)來(lái)自PR8，編碼區(qū)來(lái)自野毒株，結(jié)果顯示僅HA嵌合的RG病毒產(chǎn)量高于野毒株和HA、NA同時(shí)嵌合的RG病毒。同時(shí)應(yīng)該被考慮的疫苗制備新方法還包括細(xì)胞分離毒株、優(yōu)化重配株骨架、新型合成疫苗等。同時(shí)，應(yīng)改進(jìn)B型流感重配株平臺(tái)，構(gòu)建高產(chǎn)的B型重配株。

　　澳大利亞介紹了使用MDCK細(xì)胞（MDCK33016PF）病毒分離率的情況，結(jié)果顯示MDCK33016PF細(xì)胞系對(duì)H1、H3、BV、BY的分離率分別為80%、83%、73%和78%，均顯著高于雞胚分離率（H1：44%、H3：36%、BV：29%、BY：28%）。

　　 流感疫苗效力檢測(cè)替代方法研討

　　第三屆流感疫苗效力檢測(cè)替代方法研討會(huì)上，各ERL實(shí)驗(yàn)室、疫苗生產(chǎn)企業(yè)分別介紹了各自開展的流感疫苗效力檢測(cè)替代方法。

　　由于目前流感疫苗效力檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)SRD法使用的標(biāo)準(zhǔn)試劑需要數(shù)月的制備時(shí)間，大流感疫情突發(fā)時(shí)將制約疫苗的研發(fā)過(guò)程，這促使各機(jī)構(gòu)及企業(yè)開展效力試驗(yàn)替代方法的研究。這些方法主要分為以下三類：

　　1. 免疫學(xué)方法。使用HA抗體（特異抗體或者通用抗體）來(lái)進(jìn)行定量。主要方法包括競(jìng)爭(zhēng)ELISA、夾心ELISA、抗體芯片等。

　　2. 受體結(jié)合定量法。使用酶標(biāo)板或SPR芯片包被唾液酸α2，3或唾液酸α2，6糖受體來(lái)檢測(cè)HA含量。

　　3. 理化方法。使用HPLC，質(zhì)譜等方法對(duì)HA定量，其中同位素標(biāo)記質(zhì)譜定量法(Isotope Dilution Mass Spectrometer IDMS)已經(jīng)在CBER/NCEH/NIBSC用于液體抗原標(biāo)準(zhǔn)品（Primary liquid standards）的標(biāo)定，顯示出與傳統(tǒng)方法較好的一致性。其他方法尚需更大規(guī)模的驗(yàn)證工作。

　　由于流感病毒變異速度快，每年WHO都會(huì)根據(jù)病毒的流行情況決定疫苗生產(chǎn)毒株。因此，疫苗的生產(chǎn)面臨著生產(chǎn)毒株和效力檢測(cè)用標(biāo)準(zhǔn)品更換的問(wèn)題，直接影響當(dāng)年疫苗的生產(chǎn)和接種。參與此次會(huì)議，有助于我國(guó)掌握國(guó)際上的前沿動(dòng)態(tài)，以指導(dǎo)我們的研究和檢測(cè)工作，為提高我國(guó)流感疫苗的質(zhì)量提供技術(shù)支持。

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