国产在线精品第一区二区,国产精品不卡一区二区,国产又粗又黄又爽的大片,国产兽交xvidseos视频,国产亚洲精品美女久久久

　　葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD）廣泛存在于各種生物體內(nèi)，它是糖酵解磷酸戊糖旁路中的一個關(guān)鍵酶和限速酶，其主要的功能是產(chǎn)生還原型輔酶Ⅱ（NADPH）。NADPH對于維持細胞的正常生理功能和形態(tài)極為重要。當機體缺乏NADPH時，紅細胞極易受到氧化損傷，從而引起溶血性疾病。

　　蠶豆病是G6PD缺乏癥的一個類型，表現(xiàn)為患者在進食蠶豆或蠶豆制品后引起急性血管內(nèi)溶血性貧血，臨床表現(xiàn)為皮膚、鞏膜黃染，有些病例會出現(xiàn)血紅蛋白尿，有些則有肝腫大現(xiàn)象。蠶豆病多發(fā)于幼兒及兒童，以男性多見。G6PD基因突變是導致G6PD缺乏癥的主要原因，G6PD基因定位于Xq28，由13個外顯子和12個內(nèi)含子組成，編碼515個氨基酸。G6PD缺乏癥屬于X連鎖不完全顯性遺傳，對其進行早期診斷和預(yù)防十分重要。本文介紹G6PD相關(guān)產(chǎn)品檢測方法與性能評估要求，并概述對我國相關(guān)檢測試劑的審評思考。

　　常用檢測方法

　　目前，G6PD常用檢測方法包括酶學和基因檢測兩大類。

　　其中，酶學檢測法包括葡萄糖-6-磷酸底物法、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）/6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGD）比值法、高鐵血紅蛋白還原法、熒光斑點法等；常規(guī)基因檢測法包括等位基因特異性擴增(ARMS)、等位基因寡核苷酸探針雜交(ASO)、錯配堿基聚合酶鏈反應(yīng)/限制性內(nèi)切酶圖譜分析等。

　　已批準相關(guān)產(chǎn)品概況

　　目前，已獲批上市的G6PD相關(guān)檢測產(chǎn)品通常采用檢測G6PD基因突變情況的基因檢測法以及檢測G6PD含量及活性的酶學檢測法。檢測樣本涵蓋血清、全血、新生兒足跟血濾紙干血片等多種類型。

　　對于采用基因檢測方法的G6PD檢測產(chǎn)品，其方法學主要包括熒光PCR熔解曲線法、PCR-反向點雜交法等，用于體外定性檢測人外周血基因組DNA中的中國人群常見的G6PD基因突變。

　　G6PD酶活性檢測方法具有操作便捷、價格低廉等諸多優(yōu)點，目前廣泛應(yīng)用于臨床診斷領(lǐng)域。已上市酶學檢測產(chǎn)品的方法學多為葡萄糖-6-磷酸底物法。G6PD能夠在氧化型輔酶Ⅱ（NADP）存在條件下，催化6-磷酸葡萄糖生成6-磷酸葡萄糖醛酸和NADPH。通過在340nm處測定NADPH的生成速率，可檢測G6PD的活性。此外，還有比值法檢測試劑，其中，試劑A液和B液分別在不同通道內(nèi)采用速率法檢測紅細胞中G6PD與6PGD的活性，反應(yīng)原理均為催化其相應(yīng)的底物反應(yīng)，并將NADP還原為NADPH，通過監(jiān)測340nm處吸光度上升的速率來計算兩者的活性，再通過計算兩者的比值，進而判斷人體是否缺乏G6PD。

　　相關(guān)檢測試劑國際監(jiān)管概況

　　2016年，WHO發(fā)布《葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性檢測體外診斷試劑指導原則》，該指南根據(jù)性別和G6PD活性將人群劃分為G6PD正常、缺陷和中介（詳見表）。該指南對分析性能評估的要求概述如下。

表1 ?不同葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性人群劃分

　　適用樣本類型

　　為證明樣本類型的等效性，應(yīng)至少選用25個G6PD正常樣本、25個中介樣本和25個缺陷樣本。

　　此外，為證明聲稱抗凝劑的等效性，應(yīng)至少選用25個G6PD正常樣本、25個中介樣本和25個缺陷樣本。

　　樣本收集、儲存和運輸

　　在樣本穩(wěn)定性研究中，研究者應(yīng)考慮到儲存條件（不同溫度下的持續(xù)時間、濕度變化、溫度限制、凍融循環(huán)），運輸條件（如適用），樣本采集和轉(zhuǎn)移裝置（包括干血斑濾紙）是否含有抗凝劑、是否可以密封等諸多因素。

　　精密度

　　重復(fù)性和再現(xiàn)性試驗都應(yīng)根據(jù)預(yù)期用途選用至少1個G6PD正常樣本、1個中介樣本和1個缺陷樣本。所選樣本應(yīng)確保在關(guān)鍵決策點附近、具有良好的G6PD活性代表性。必須證明關(guān)鍵決策點附近樣本的精密度。每個測試樣本應(yīng)采用3批試劑，進行5個重復(fù)，運行3-5次，選擇3個不同的試驗地點，酶學方法還應(yīng)選用2個溫度。

　　分析靈敏度

　　最低檢出限

　　選擇至少8個樣本進行最低檢出限研究，每個濃度至少檢測15次。將95%檢出率的最低酶活性作為最低檢出限。所檢測樣本的酶活性應(yīng)采用合適的生物學參考物質(zhì)以及合適的參考方法進行校正。

　　關(guān)鍵決策點性能驗證

　　必須驗證相關(guān)試劑區(qū)分G6PD活性（如正常、缺陷、中介）的能力。可通過采用含不同比例G6PD正常和缺陷的混合樣本，獲得廣泛的G6PD活性，從而了解決策點（即缺陷/中介/正常）的性能。需要注意的是，應(yīng)至少測試三對單獨試樣的混合物。

　　測量范圍和相關(guān)性

　　定量檢測試劑必須采用經(jīng)合適生物學參考物質(zhì)以及合適參考方法進行校正的、G6PD活性已知的樣本進行測量范圍研究。對于已知G6PD活性樣本的平行試驗結(jié)果，應(yīng)進行適當?shù)慕y(tǒng)計分析，還應(yīng)確定定量與適當參考試驗的相關(guān)性程度。

　　對于報告血紅蛋白濃度或?qū)⒀t蛋白濃度標準化作為報告結(jié)果一部分的試劑，還必須確定測定血紅蛋白濃度的定量測量范圍和相關(guān)程度。

　　分析特異性

　　特異性研究必須研究假正?；蚣偃毕萁Y(jié)果的可能性，研究可采用自然或人工樣本進行。內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括總膽固醇，血脂、膽紅素和蛋白質(zhì)升高樣本，乳酸，乳酸脫氫酶，含銅化合物（如氯化銅、硫酸銅），異常高值（54%-65%）和異常低值（17%-18%），血球壓積，網(wǎng)織紅細胞，白細胞和血小板升高樣本，瘧疾，甲型肝炎，乙型肝炎，丙型肝炎，艾滋病毒，肺炎，傷寒，鐮狀細胞貧血，變異血紅蛋白（A、D、E、S、C），貧血，血紅蛋白病，缺鐵，白血病或其他紅細胞疾病，糖尿病等。外源性干擾物質(zhì)包括相關(guān)藥物，如抗寄生蟲、抗瘧疾、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒和抗結(jié)核藥物、普通非處方抗炎藥物（阿司匹林、撲熱息痛、布洛芬），乙醇，咖啡因和某些類固醇（醛固酮相關(guān)）。

　　目前，我國已有G6PD檢測相關(guān)產(chǎn)品獲批上市，還有部分產(chǎn)品正處于研發(fā)或計劃申報階段。此類產(chǎn)品用于對人體樣本中的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶進行檢測，在臨床上主要用于遺傳性紅細胞G6PD缺乏癥輔助診斷，產(chǎn)品臨床風險較高。

　　當前，相關(guān)企業(yè)在產(chǎn)品研發(fā)過程中對產(chǎn)品的認識程度不一，在參考品設(shè)置、分析性能評估等方面仍存在諸多問題有待解決。因此，有必要對這些共性問題進行總結(jié)規(guī)范，為申報企業(yè)從產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)至注冊申報階段提供更為全面的指導，為相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)審評提供參考依據(jù)。

　?。ㄗ髡邌挝唬簢宜幈O(jiān)局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心）

(責任編輯：譙英固)